選擇液相色譜柱要考慮哪些因素？

選擇液相色譜柱時(shí)需要考慮的主要因素包括：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量，下面來(lái)一一介紹：

 

1、鍵合相：確定了正反相后基本就簡(jiǎn)單了，正相很簡(jiǎn)單，我們重點(diǎn)討論下反相，C18主要分離非極性和弱極性物質(zhì)，因為是鍵合硅膠，所以C18也分好幾種有常規的如C18-A，耐純水的OL Apple C18-AQ、耐酸堿的OL Apple C18-EX等，如果發(fā)現C18保留很弱，調整流動(dòng)相也不行，這個(gè)時(shí)候可以考慮C8甚至C4等。

 

2、粒徑：色譜法追求的是、高分辨、高速等。目前來(lái)說(shuō)亞2um填料或者2UM核殼填料是很理想的模型，基本具備“三高”特征尤其是高速，線(xiàn)速度不在影響分離度，不過(guò)附帶的缺點(diǎn)就是高壓，要升級相應的硬件，成本高昂，需要謹慎考慮。5um填料普遍，目前來(lái)說(shuō)可以勝任各種日常檢測，即使有特殊要求，3um色譜填料基本上也能全覆蓋，不過(guò)該模型下線(xiàn)速度和分離度是成反比的。

 

3、孔徑：目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。開(kāi)孔的填料多了個(gè)類(lèi)似分子篩功能，所以選擇孔徑一定要關(guān)注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔徑都很小，可以縮短樣品路徑。所以上還有無(wú)孔硅膠柱子，也很適合蛋白分離，解決蛋白分子量大和太粘稠堵住孔徑問(wèn)題。

 

4、碳載量：快速柱碳載量很低，如A家等，省時(shí)間，省溶劑，但分析部分復雜樣品如中藥等有點(diǎn)力不從心，這個(gè)時(shí)候可以考慮英國OL Apple色譜柱，碳載量15~23%，碳載量數值就像河床的水草，越高代表越密集，保留樣品能力越強，越有可能分離開(kāi)難分離物質(zhì)。